Resultado Proyecto

Diagnóstico y caracterización de Pseudomonas fitopatógenas en cultivos de interés agroalimentario en el Principado de Asturias

Referencia: RTA2005-0076-00-00. Organismo financiador: Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria. Importe: 59.400 €. Duración: 2005-2008.

Equipo investigador

Ana J. González Fernández SERIDA
Dolores Loureiro Rodríguez SERIDA
Germán González Varela INIA (Becario)
Mª Rosario Rodicio Rodicio Universidad de Oviedo
Mª Carmen Mendoza Fernández Universidad de Oviedo (Asesora)

Entidades Colaboradoras

Caja Rural de Asturias
Universidad de Oviedo

Avance de resultados

Las bacterias aisladas de kiwi durante las campañas de 2003 a 2005 están siendo identificadas utilizando como base las pruebas bioquímicas y la técnica ARDRA (Amplified rDNA restriction analysis), utilizando SacI e HinfI, para confirmar si son Pseudomonas syringae o P. viridiflava. En los casos en los que no se ajusta a ninguna de las dos bacterias, se secuencia el ADNr 16S. Dado el gran número de aislamientos a identificar, esta tarea no ha concluido aún. Se caracterizaron ya 61 aislamientos de 2004 y 90 de 2005.

En cuanto al estudio de las malas hierbas asociadas al cultivo de faba granja, como posibles reservorios de bacterias, conviene resaltar que se analizaron muestras de tres fincas de la zona occidental de Asturias que presentaron daños por grasa y se ha podido confirmar la presencia de la bacteria en tres muestras de malas hierbas diferentes.

El análisis mediante macrorrestricción genómica con la endonucleasa PmeI y posterior electroforesis en campo pulsante (PFGE) se aplicó a los aislamientos de P.s. pv. phaseolicola de la colección del SERIDA, lo que permitió separar las cepas en dos grupos, uno que incluye cepas de procedencia asturiana y castellano-leonesa, que no utilizan manitol como única fuente de carbono y son tox +, y otro que sólo incluye cepas de Castilla y León, que tienen la capacidad de utilizar manitol como fuente de carbono y no presentan el “cluster” tox (responsable de la producción de faseolotoxina). También, se utilizó el análisis plasmídico mediante digestión con la nucleasa S1 y la electroforesis en campo pulsante (S1-PFGE), obteniéndose una gran diversidad de perfiles plasmídicos.

Caracterización patogénica:

1. Se realizaron 56 inoculaciones de bacterias aisladas de kiwi en planta en producción al aire libre.
2. Se llevaron a cabo inoculaciones en faba granja asturiana con seis aislamientos obtenidos en 2006 de fincas con sintomatología de bacteriosis. De ellos, un aislamiento que correspondía a Pseudomonas syringae mostró una virulencia mayor que ninguno de los ensayados hasta ese momento, siendo capaz de matar las seis plantas inoculadas.
3. Se comprobó, mediante inoculación en planta sana, que dos aislamientos de Pseudomonas aislados de un cultivo de soja forrajera con síntomas de enfermedad causan daños a la planta coincidentes con los observados en campo.