Resultado Proyecto

Patrón de eliminación de la Neospora caninum en el semen de toros con infección aguda y crónica. Evaluación del semen como vía de transmisión

Referencia: MEC PTR 1995-0780-OP. Organismo financiador: Ministerio de Educación y Ciencia. Importe: 120.000 €. Duración: 2004-2007.

Equipo investigador

Luis Ortega Mora Universidad Complutense de Madrid
Ignacio Ferre Pérez Universidad Complutense de Madrid
Gorka Aduriz Rekalde NEIKER
Raquel Atxaerandio Galdós NEIKER
Koldo Osoro Otaduy SERIDA
Antonio Martínez Martínez SERIDA

Avance de resultados

Neosporosis experimental en sementales bovinos.

Para estudiar la infección experimental por Neospora caninum en sementales bovinos se infectaron ocho toros con 10⁸ taquizoítos de la cepa NC-1 de N. caninum. En paralelo, ocho toros no infectados actuaron como testigos. Todos los toros infectados experimentalmente mostraron ADN del parásito en muestras de semen y sangre en algún momento a lo largo de las 26 semanas de estudio. La carga parasitaria detectada en el semen osciló entre 0,1 y 14,5 (media 6,0) parásitos/ml. Se detectaron IgM séricas específicas entre los días 10 y 28 posinfección y los valores de IgG específicas se incrementaron significativamente desde los 21 días posinfección. La cinética sérica de IgG fue semejante en todos los toros infectados, aunque su magnitud varió entre individuos, incrementando significativamente los valores séricos de IgG1 e IgG2 específicas desde los días 10 y 14 posinfección, respectivamente, y siendo la respuesta predominante la IgG1. Además, se detectaron IgG específicas en el plasma seminal de todos los sementales infectados. Los valores de interferón-gamma se incrementaron significativamente desde los tres días posinfección en todos los toros infectados, permaneciendo elevados durante todo el periodo de estudio. No se detectó asociación alguna entre la presencia y cantidad de parásitos en el semen y la magnitud de las respuestas de anticuerpos específicos e interferón-gamma. En resumen, nuestras observaciones indican la presencia intermitente de N. caninum en el semen asociada a la fase crónica de la infección. La carga parasitaria en el semen es ligeramente superior a la encontrada en los toros infectados naturalmente. Sin embargo, no fue posible aislar N. caninum en los ratones atímicos inoculados con muestras de semen positivas debido al escaso número de parásitos.

Efecto de la reinfección sobre la eliminación de Neospora caninum en semen.

Tres toros con neosporosis crónica, inducida experimentalmente, se reinfectaron con 10⁸ taquizoítos de la cepa NC-1 de N. caninum para investigar la presencia del parásito en el semen y la sangre. En paralelo, también se estudiaron (durante 13 semanas) tres toros con neosporosis crónica inducida experimentalmente y tres toros no infectados. Las muestras de semen positivas se inocularon en ratones atímicos para tratar de aislar el parásito y, además, cada semana se inseminó una novilla seronegativa con el semen procedente de todos los toros infectados. Todos los sementales reinfectados mostraron ADN del parásito en el semen y la sangre en algún momento del estudio. La carga parasitaria osciló entre 0,1 y 15,6 (media 4,4) y 0,1 y 11,1 (media 4,1) parásitos/ml de semen en los toros reinfectados y con infección crónica, respectivamente. Se detectó una respuesta serológica temprana de IgG específica en los toros reinfectados, que se mantuvo incrementada respecto a los toros infectados crónicamente durante todo el experimento. También se detectó IgG específica en el plasma seminal de los animales reinfectados y sus valores fueron siempre superiores respecto a los infectados crónicamente. Sin embargo, no se detectó el parásito en los cerebros de los ratones atímicos inoculados, ni las novillas inseminadas mostraron una respuesta de anticuerpos específica.

Transmisión seminal experimental de la neosporosis bovina.

Para conocer si es posible la transmisión seminal de N. caninum, se investigó el potencial de taquizoítos del parásito para infectar novillas cuando se administraron in utero vía semen contaminado mediante inseminación artificial. Para ello, 18 novillas seronegativas frente a N. caninum se sincronizaron hormonalmente y, posteriormente, se inseminaron artificialmente. Nueve de las novillas se inseminaron con semen que contenía 10⁷ taquizoítos vivos de la cepa NC-1 de N. caninum (grupo infectado) y las otras nueve se inseminaron con semen procedente de toros seronegativos frente a N. caninum, actuando como grupo testigo. En las novillas del grupo infectado se observó un respuesta inmune humoral (IgG) específica frente a N. caninum desde los 18 días posinfección. Además, también se observó un incremento de la respuesta de interferón-gamma, confirmándose también la infección al detectar ADN de N. caninum en la sangre de todas ellas. Las novillas del grupo testigo no mostraron respuesta inmune específica, ni respuesta de interferón-gamma, ni parasitemia. El porcentaje de novillas gestantes fue del 100%.

Titulación de la dosis infectante.

También, se ha tratado de averiguar la dosis mínima infectante siguiendo el mismo procedimiento, pero contaminando el semen con cantidades diferentes de taquizoítos (10², 5x10³,5x10⁴ y 5x10⁵) e inoculando novillas seronegativas y vacas seronegativas de desvieje. Los resultados obtenidos demuestran que alguna de las novillas inoculadas con 5x10⁴ y 5x10⁵ taquizoítos muestran una respuesta persistente de anticuerpos específicos. Se observaron, también, respuestas transitorias de anticuerpos específicos en algunas novillas inoculadas con 5x10³ taquizoítos. El porcentaje de novillas gestantes en el grupo testigo (60%) fue superior al observado en los grupos de novillas inoculadas (0-42,9%) y, además, el número de novillas gestantes en este grupo disminuía significativamente a medida que se incrementaba el número de taquizoítos en el semen. Respecto a las vacas, sólo una inoculada con 5x10⁵ taquizoítos mostró una respuesta sérica de anticuerpos específicos.

Este trabajo demuestra que la infección intrauterina de novillas con semen contaminado a partir de 5x10⁴ taquizoítos de N. caninum origina una respuesta de anticuerpos séricos específicos en las novillas inoculadas, observándose un efecto dosis-respuesta. Además, N. caninum podría ser una causa de absorción embrionaria o muerte fetal temprana.