Resultado Proyecto

Desarrollo de un método de diagnóstico rápido de la sarna sarcóptica basado en el uso de un antígeno recombinante unitario

Referencia: RTA2006-00046-00-00. Organismo financiador: Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria. Importe: 55.400 €. Duración: 2006-2009.

Equipo investigador

Rosa Casais Goyos SERIDA
José Miguel Prieto Martín SERIDA
Pablo González Quirós BIOGESTION

Equipo técnico

Paloma Solano Sobrado SERIDA

Avance de resultados

- El escrutinio de la genoteca de ADNc Yv4de S. scabiei var. hominis , utilizando el suero de un rebeco infectado, dio lugar a la identificación de 11 clones inmunoreactivos denominados Ssλ2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 15 y 20 .

- La determinación de la secuencia de nucleótidos de los clones de ADNc presentes en los bacteriófagos recombinantes Ssλ2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 15 y 20 permitió su clasificación en tres grupos: El grupo I contiene dos clones (Ssλ2 y Ssλ11) que corresponden a dos genes únicos. El grupo II dispone de dos ADNc (Ssλ8 y Ssλ12) que contienen secuencias derivadas de un mismo gen. Y el grupo III, se compone de 7 clones (Ssλ3-4-5-6-9-15-20) cuyas secuencias derivan del mismo gen. La comparación de la secuencia de nucleótidos de los clones seleccionados con las bases de datos, no reveló la existencia de identidad con ningún gen o proteína conocidos.

- El clon Ssλ20 contiene un ADNc de 2 kb que codifica un antígeno inmunodominante, cuya expresión en E. coli da lugar a la producción de una proteína soluble. El polipéptido Ssλ20∆B3, una versión deleccionada del antígeno codificado por Ssλ20, se produce en E. coli como una proteína soluble que se expresa con un alto rendimiento.

- El polipéptido Ssλ20∆B3 purificado se empleó para producir un antisuero específico en conejo. Este antisuero se utilizó para determinar la localización de este antígeno en S. scabiei mediante técnicas de inmunohistoquímica. El polipéptido Ssλ20∆B3 se localiza en el tegumento interno de la epidermis y los espacios que rodean los órganos vitales del parásito. Esta localización sugiere que Ssλ20∆B3 podría cumplir una función estructural en el ácaro.

Tinción inmunohistoquímica de ácaros de S. scabiei en piel de rebeco (PAP, X40).

- Se desarrolló una prueba serológica que permite la detección de anticuerpos específicos frente a S. scabei en suero sanguíneo, utilizando un ELISA indirecto basado en el empleo del antígeno recombinante Ssλ20∆B3 (Casais et al., 2007).

- La validez del ensayo para realizar la vigilancia epidemiológica de esta zoonosis fue analizada en dos especies silvestres en las que la enfermedad tiene gran repercusión, el rebeco y el ciervo, y en una especie doméstica: la cabra. Así, se comprobó que este ELISA tiene en el rebeco un punto de corte de 0,16, una sensibilidad del 100 % y una especificidad del 97 %. En el ciervo tiene un punto de corte de 0,43, una sensibilidad del 75 % y una especificidad del 97 %. En la cabra e l punto de corte del ensayo resultó ser de 0,5 y la especificidad del ensayo del 100 %. La sensibilidad de la técnica para el diagnóstico en cabra no pudo ser calculada debido a que no disponemos de sueros de cabras en los que se haya demostrado la presencia de sarna.

- Se descartó la existencia de reacciones cruzadas en el ELISA entre sueros procedentes de animales infectados con garrapatas (Arthropod, Arácnida, Ixodes ricinos ), que es un artrópodo próximo evolutivamente al ácaro S. scabiei , y el antígeno Ssλ20∆B3.

- La técnica desarrollada ha sido aplicada con éxito al estudio de la enfermedad en varias especies de animales silvestres, tales como el rebeco ( Rupicapra pyrenaica parva ) (Falconi y col., 2009), el ciervo ( Cervus elaphus ) (Oleaga y col., 2008a), el corzo ( Capreolus capreolus ) (Oleaga y col., 2008b), el zorro ( Vulpes vulpes ) y el lobo ( Canis lupus ); y domésticos (la cabra) en Asturias (Falconi y col., 2009).