Resultado Proyecto

Valoración no invasiva de la viabilidad de ovocitos de especies domésticas por Microscopia de Luz Polarizada

Referencia: RZ2007-00013-00-00. Organismo financiador: Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria. Importe: 38.461 €. Duración: 2007-2010.

Equipo investigador

José Néstor Caamaño Gualdoni. SERIDA
Enrique Gómez Piñeiro. SERIDA
Carmen Díez Monforte. SERIDA
Marta Muñoz Llamosas. SERIDA
Emilio Martínez García. Universidad de Murcia
María Antonia Gil Corbalán. Universidad de Murcia
Cristina Cuello Medina. Universidad de Murcia

Entidades Colaboradoras

Laboratorio de Fertilización In Vitro. Facultad de Veterinaria de la Universidad Autónoma de Barcelona.
Facultad de Veterinaria. Departamento de Medicina y Cirugía Animal. Universidad de Murcia.

Avance de resultados

Los resultados más relevantes obtenidos son los siguientes:

Objetivo 1

- Porcino: Se evaluó un total de 97 ovocitos (seis réplicas) y se logró detectar, por microscopia de luz polariza (MLP), una estructura que se clasificó como posible huso meiótico. Los ovocitos fueron procesados por inmunocitoquímica para determinar la presencia efectiva del huso meiótico. Se determinó que había una correlación positiva (r=1; p<0,0001) entre la señal obtenida por MLP y la presencia de microtúbulos polimerizados. Se observó que el 94,8% de las muestra presentaba una estructura típica del huso meiótico (barrel-shape spindle) (Figura 1). El resto de ovocitos presentaban estructuras que se clasificaron como anormales.

Figura 1. Ovocitos porcinos madurados in vitro evaluados por A) microscopia convencional, B) microscopia de luz polarizada, C) inmunocitoquímica del huso meiótico-microscopia confocal.

- Ovinos y Caprinos: Para trabajar con ovocitos de las especies indicadas se contó con la colaboración del Laboratorio de Fertilización In Vitro de la Facultad de Veterinaria de la Universidad Autónoma de Barcelona. Se logró poner a punto la técnica de inmunocitoquímica para la detección del huso meiótico en ovocitos ovinos y caprinos y se realizaron las réplicas planificadas, detectándose el huso meiótico por MLP en ovocitos de ovejas y de cabras.

Objetivo 2

- Porcino: Los ovocitos expuestos a la MLP no muestran diferencias estadísticamente significativas en el desarrollo embrionario si se comparan con ovocitos no expuestos. Además, el número de células totales no son diferentes entre los dos grupos. Para evaluar la viabilidad de los ovocitos, fueron activados eléctricamente y para desarrollar los protocolos de activación partenogenética se contó con la colaboración del grupo de investigación de la Facultad de Veterinaria del Departamento de Medicina y Cirugía Animal de la Universidad de Murcia.

Como conclusión del trabajo realizado en ovocitos bovinos y porcinos se determinó que los ovocitos expuestos a la MLP no muestran diferencias estadísticamente significativas en el desarrollo embrionario si se comparan con ovocitos no expuestos.