Resultado Proyecto

Potencial epizoótico de cepas de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis aisladas de ganado y de fauna silvestre

Referencia: FAU2008-00018-C02-02. Organismo financiador: Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria. Importe: 18.956 €. Duración: 2008-2011.

Equipo investigador

José Miguel Prieto Martín SERIDA
Alberto Espí Felgueroso SERIDA
Rosa Casais Goyos SERIDA
Ana Balseiro Morales SERIDA
Marta Alonso Frenanadez NEIKER
José Francisco Ruiz Fons NEIKER

Equipo técnico

Paloma Solano Sobrado SERIDA

Avance de resultados

El objetivo del proyecto es comparar la virulencia y potencial de cepas de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) aisladas de diferentes hospedadores y localizaciones geográficas. Por parte del SERIDA, la tarea principal  fue  conseguir cepas de Map de gamos y bovinos del Sueve, así como  poner a punto un sistema de detección de anticuerpos frente a Map en gamos y bovinos mediante ELISA. Se realizaron 15 salidas de campo, recogiéndose muestras de 17 gamos y dos vacas.

En cuanto a los resultados, hay que destacar que se han obtenido cuatro cepas de Map, tres procedentes de gamo y una de bovino.

La puesta a punto de un ELISA en gamos consistió en  la preparación de dos tipos de antígenos a partir de un cultivo denso de Map (cepa G-89). Después de diferentes tratamientos físico-químicos, se obtuvo un antígeno protoplasmático (A6) y otro proteico (A7). Se compararon con un antígeno comercial de Allied Monitor (PPA). Para poner a punto el método, se emplearon 42 sueros de gamo. Como prueba de referencia se usó la histopatología. Los sueros de gamos se distribuyeron en: siete animales con lesiones del tipo difusas con presencia de Map, 18 sueros procedentes de gamos con lesiones multifocales y focales sin presencia de Map y otros 17 procedentes de gamos sin ningún tipo de lesión. Los anticuerpos secundarios fueron dos, un policlonal de conejo conjugado con peroxidasa (AG), realizado por nosotros, y el clásico comercial de proteina A-G de Pierce (PG). En la Figura 1, se muestran las densidades ópticas (DO) y las desviaciones típicas obtenidas de los sueros de gamos de las tres categorías de lesiones. Estos resultados muestran que los antígenos obtenidos con una cepa de Map de gamo producen unas DO superiores a las obtenidas con la PPA comercial de bovino. El anticuerpo secundario AG produce una señal muy superior a la obtenida con la PG, especialmente cuando se utiliza el antígeno A6.  La mejor sensibilidad y especificidad del ensayo se obtuvo con el antígeno A7 y con el anticuerpo secundario AG, siendo la sensibilidad del 84 % y la especificidad del 76%.

Figura 1. Representación de las medias de DO de sueros de gamos con diferentes grados de lesiones.